雖然自動(dòng)化儀器已經(jīng)開始占領(lǐng)了微生物檢驗(yàn)的市場(chǎng)，但是其成本是十分的高，特別是基層醫(yī)院很難用的起，所以我們不要忘了基礎(chǔ)的東西，從基礎(chǔ)一步一步去掌握我們的任何一個(gè)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目。不要因?yàn)橛袃x器直接給出相對(duì)正確的結(jié)果而忽略了您應(yīng)該知道的基礎(chǔ)知識(shí)。

文字是枯燥的，微生物也是枯燥的，忍受文字上帶來的不悅，耐心的和我一起學(xué)習(xí)去，也許就會(huì)帶來精神上的升華和臨床技術(shù)水平的提高。

第三節(jié)：常用的微生物培養(yǎng)基

3.1培養(yǎng)基的組成成分

3.1.1營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

細(xì)菌需要的基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)含有氮源、碳源、無機(jī)鹽類和生長(zhǎng)因子等，常用的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如下：

蛋白胨提供氮源。是動(dòng)物或植物蛋白質(zhì)經(jīng)酶或酸堿分解而成。含胨、多肽和多種氨基酸，為大多數(shù)細(xì)菌生長(zhǎng)所利用，尤其是含大量色氨酸的胰蛋白胨，更適于測(cè)靛基質(zhì)用的蛋白胨。蛋白胨易溶于水，遇酸不沉淀，不因受高溫而凝固，并對(duì)兩性電解質(zhì)有緩沖作用。但吸水性強(qiáng)，應(yīng)注意干燥密封保存。

肉浸液是用新鮮牛肉浸泡、煮沸而制成的肉汁。其中含有可溶性含氮浸出物（肌酸、黃嘌呤、腺嘌呤、次黃嘌呤核苷酸、谷氨酸、甘氨酸等）和非含氮浸出物（肝糖、乳酸、琥珀酸、磷酸己糖、脂肪、無機(jī)鹽類等）。還有一些生長(zhǎng)因子。肉浸液提供氮源和碳源，但肉浸液中所含氮物質(zhì)過少而不能滿足細(xì)菌的需要，因此在制備培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)再加入1%～2%的蛋白胨和0.5%氯化鈉。

牛肉膏由肉浸液經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間加熱濃縮而制成。糖類在加熱過程中被破壞，所以其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值低于肉浸液，但因無糖可用作腸道桿菌鑒別培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分。由于使用方便，常用于制備培養(yǎng)基。

糖類、醇類提供碳源和能源。制備培養(yǎng)基所用的糖類、醇類有多種，常用的糖類有單糖（葡萄糖、阿拉伯糖等）、雙糖（乳糖、蔗糖等）和多糖（淀粉、菊糖等）；常用的醇類有甘露醇、衛(wèi)茅醇等。除葡萄糖、蔗糖主要作為碳源和能源的基本成分外，其他糖類和醇類主要用于鑒定細(xì)菌所做的發(fā)酵反應(yīng)。

無機(jī)鹽類提供細(xì)菌生長(zhǎng)的各種元素，如：鉀、鈉、鐵、鎂、鈣、磷、硫等。用于制備培養(yǎng)基的無機(jī)鹽類有多種，其中最常用的有氯化鈉和磷酸鹽，前者對(duì)維持酶的活性、調(diào)節(jié)菌體內(nèi)外的滲透壓非常重要，后者是細(xì)菌良好的磷源，并在培養(yǎng)基中具有緩沖作用。

雞蛋和動(dòng)物血清雖然不是構(gòu)成培養(yǎng)基的基本成分，但卻是某些細(xì)菌生長(zhǎng)所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，所以僅用于制備一些特殊的培養(yǎng)基，這些細(xì)菌直接從雞蛋和動(dòng)物血清中獲取營(yíng)養(yǎng)。如培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌的雞蛋培養(yǎng)基和培養(yǎng)白喉?xiàng)U菌的呂氏血清培養(yǎng)基等。

生長(zhǎng)因子是細(xì)菌生長(zhǎng)所必需的，但需要量很小。在制備培養(yǎng)基時(shí)，常在肝浸液、肉浸液、酵母浸液和含血液培養(yǎng)基中加入維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等生長(zhǎng)因子。

3.1.2凝固物質(zhì)：制備固體培養(yǎng)基時(shí)，需要在液體中加入凝固物質(zhì)。最常用的凝固物質(zhì)為瓊脂，特殊情況下也可用明膠、卵白蛋白、血清等。無營(yíng)養(yǎng)作用。

3.1.3抑制劑和指示劑：用于選擇、鑒定及判斷結(jié)果。

抑制劑有選擇抑制作用，抑制非檢出菌（非病原菌）的生長(zhǎng)，以利于檢出菌（病原菌）的生長(zhǎng)。常用的有膽鹽、煌綠、亞硫酸鈉、亞硒酸鈉及一些染料和某些抗生素等。

指示劑：觀察細(xì)菌是否利用和分解培養(yǎng)基中的糖、醇類。常用的有酚紅、中性紅、甲基紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍(lán)、中國(guó)藍(lán)等酸堿指示劑。亞甲藍(lán)常用作氧化還原指示劑。

3.2培養(yǎng)基種類

3.2.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含有基礎(chǔ)生長(zhǎng)所需的基本營(yíng)養(yǎng)成分，最常用的是肉浸液，俗稱肉湯，主要成分含牛肉浸液和蛋白胨?；A(chǔ)培養(yǎng)基廣泛用于細(xì)菌的增菌、檢驗(yàn)，也是制備其他培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分。

3.2.2營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中可加入葡萄糖、血液、生長(zhǎng)因子等特殊成分，供營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌和需要特殊生長(zhǎng)因子的細(xì)菌生長(zhǎng)。最常用的是血瓊脂平板、巧克力血平板（如下）等。

3.2.3鑒別培養(yǎng)基：利用細(xì)菌分解糖類和蛋白質(zhì)的能力及其代謝產(chǎn)物的不同，在培養(yǎng)基中加入特定的作用底物和指示劑，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)過程中分解底物所釋放的不同產(chǎn)物，通過指示劑的反應(yīng)不同來鑒別細(xì)菌。如糖發(fā)酵管、克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）、伊紅-亞甲藍(lán)瓊脂和動(dòng)力-吲哚-尿素（MIU）培養(yǎng)基等。

3.2.4選擇培養(yǎng)基；在培養(yǎng)基中加入抑制劑，去抑制標(biāo)本中的雜菌生長(zhǎng)，有助于所選擇的細(xì)菌種類的生長(zhǎng)。例如培養(yǎng)腸道致病菌的SS瓊脂，其中的膽鹽能抑制革蘭陽(yáng)性菌，枸櫞酸鈉和煌綠能抑制大腸埃希菌，因而使致病的沙門菌、志賀菌容易分離到。

3.2.5特殊培養(yǎng)基：包括厭氧培養(yǎng)基和細(xì)菌L型培養(yǎng)基等。前者是培養(yǎng)專性厭氧菌的培養(yǎng)基，除含營(yíng)養(yǎng)成分外，還加入還原劑以降低培養(yǎng)基的氧化還原電勢(shì)，如皰肉培養(yǎng)基、巰基乙醇酸鈉培養(yǎng)基等。后者是針對(duì)細(xì)胞壁缺損的細(xì)菌L型，由于胞內(nèi)滲透壓較高，故培養(yǎng)該菌時(shí)必須采用高滲（3%～5%NaCl、10%～20%蔗糖或7%聚乙烯吡咯烷酮等）低瓊脂培養(yǎng)基。

3.3分離培養(yǎng)基的選擇：臨床標(biāo)本送往細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)立即接種到適當(dāng)?shù)姆蛛x培養(yǎng)基上。依據(jù)衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心推薦，細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有如下分離培養(yǎng)基：

3.3.1血平板適于各類細(xì)菌的生長(zhǎng)，一般細(xì)菌檢驗(yàn)標(biāo)本的分離，都應(yīng)接種此平板。

3.3.2巧克力血平板其中含有V和X因子，適于接種疑有嗜血桿菌、奈瑟菌等的標(biāo)本。

3.3.3中國(guó)藍(lán)平板或伊紅亞甲藍(lán)平板可抑制革蘭陽(yáng)性細(xì)菌，有選擇地促進(jìn)革蘭陰性細(xì)菌生長(zhǎng)，是較好的弱選擇性培養(yǎng)基。發(fā)酵型革蘭陰性桿菌因分解乳糖能力不同，在此平板上菌落顏色不同，便于鑒別菌種。

3.3.4麥康凱平板具中等強(qiáng)度選擇性，抑菌力略強(qiáng)，有少數(shù)革蘭陰性菌不生長(zhǎng)。在麥康凱平板上能否生長(zhǎng)，是不發(fā)酵菌鑒定的一個(gè)依據(jù)。

3.3.5.SS瓊脂有較強(qiáng)的抑菌力，用于志賀菌和沙門菌的分離。因選擇性過強(qiáng)，可影響檢出率，所以，使用時(shí)最好加一種弱選擇平板以配對(duì)互補(bǔ)。

3.3.6.堿性瓊脂或TCBS瓊脂用于從糞便中分離霍亂弧菌及其他弧菌。

3.3.7血液增菌培養(yǎng)基用于從血液、骨髓中分離常見病原菌。

3.3.8營(yíng)養(yǎng)肉湯用于標(biāo)本及各類細(xì)菌的增菌培養(yǎng)。

3.3.9 MH瓊脂平板：用于細(xì)菌的抗生素敏感試驗(yàn)。MH瓊脂平板是WHO推薦的適用于K-B法測(cè)定細(xì)菌對(duì)抗菌藥物敏感性的培養(yǎng)基。對(duì)于同種細(xì)菌不同藥敏紙片，抑菌環(huán)越大，表示抗生素對(duì)此細(xì)菌抑制能力越強(qiáng)。反之越弱。

3.3.10沙保弱培養(yǎng)基：白色念珠菌的鑒定和培養(yǎng)，將檢材接種于沙保弱瓊脂培養(yǎng)基，攝氏25度孵育3－4天后，即可在培養(yǎng)基表面形成乳白色（偶見淡黃色）類酵母菌落。

3.3.11念珠菌顯色培養(yǎng)基：用于白色念珠菌分離和鑒定。通過顯色來區(qū)別不同念珠菌，白色念球菌顯藍(lán)綠色，熱帶念珠菌顯藍(lán)灰色或鐵藍(lán)色，光滑念珠菌顯紫色，克柔假絲酵母顯粉色，其它顯白。3.3.12B群鏈球菌顯色平板：添加了特異性的酶底物，經(jīng)B群鏈球菌的酶解作用釋放出顯色原從而使細(xì)菌呈現(xiàn)出不同的顏色。淡紅色到深紅色是B群鏈球菌。藍(lán)色，綠色，無色或被抑制是其他細(xì)菌。

3.4根據(jù)標(biāo)本來源和可能存在的病原菌，確定選用各種分離培養(yǎng)基

大部分細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本—血平板、巧克力平板

糞便標(biāo)本---EMB、SS、MAC、TCBS

酵母樣真菌培養(yǎng)---念珠菌顯色平板、沙保弱平板

淋病培養(yǎng)標(biāo)本—淋球菌平板

中段尿---血平板，若做菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可聯(lián)合血平板、普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂，及或麥康凱（或中國(guó)藍(lán)）

腦脊液標(biāo)本---血瓊脂、巧克力瓊脂、麥康凱或中國(guó)藍(lán)平板、CHROMagar或者沙保羅瓊脂。若懷疑有專性厭氧菌感染時(shí)，可增加厭氧培養(yǎng)基。

痰標(biāo)本--血平板、加萬古霉素的巧克力平板、CHROMagar或含氯霉素的SDA等。

疑白喉--亞碲酸鉀血瓊脂、呂氏血清斜面或雞蛋斜面。

疑為百日咳桿菌--鮑-金(Bordet-Gengou)平板。

疑金葡感染致偽膜性腸炎的糞便標(biāo)本---疊氮鈉血瓊脂，亦可用選擇性培養(yǎng)基

疑似霍亂弧菌感染的糞便標(biāo)本----堿性蛋白胨水

懷疑有苛養(yǎng)菌（淋球菌、杜克雷嗜血桿菌等）感染者的尿細(xì)菌培養(yǎng)--加種巧克力培養(yǎng)基和TM培養(yǎng)基。

信息來源：司南說檢驗(yàn)微信公眾號(hào)